Autofluorescența este o problemă comună în imagistica celulară, care poate afecta în mod semnificativ calitatea și acuratețea rezultatelor. În calitate de furnizor de top de sisteme de imagistică celulară, am văzut direct cum acest lucru poate fi o adevărată durere de cap pentru cercetători. În acest blog, voi împărtăși modul în care sistemele noastre de imagistică celulară gestionează autofluorescența pentru a vă asigura că obțineți cele mai bune imagini posibile.
Ce este autofluorescența?
Înainte de a ne aprofunda în modul în care sistemele noastre se confruntă cu autofluorescența, să trecem rapid peste ce este aceasta. Autofluorescența este emisia naturală de lumină de către moleculele biologice din interiorul celulelor atunci când acestea sunt excitate de lumină. Acest lucru poate proveni din lucruri precum NADH, flavine și porfirine. Deși este o parte normală a biologiei celulare, poate fi o problemă în imagistica prin fluorescență, deoarece poate crea un semnal de fundal care maschează fluorescența specifică pe care încercați să o detectați.
Provocările autofluorescenței în imagistica celulară
Autofluorescența poate cauza mai multe probleme în imagistica celulară. În primul rând, poate reduce raportul semnal-zgomot. Când există multă autofluorescență, devine mai greu să distingeți semnalul fluorescent specific de molecula țintă. Acest lucru poate face dificilă cuantificarea cu precizie a țintei dvs. sau pentru a vedea detalii fine în celulele dvs.
În al doilea rând, autofluorescența poate varia în funcție de tipul celulei, de condițiile de creștere și chiar de vârsta celulelor. Aceasta înseamnă că este posibil să obțineți niveluri diferite de autofluorescență în diferite experimente, ceea ce face dificilă compararea rezultatelor.
Cum sistemele noastre de imagistică celulară abordează autofluorescența
1. Tehnologie avansată de filtrare
Unul dintre modurile cheie prin care sistemele noastre de imagistică celulară gestionează autofluorescența este prin tehnologia avansată de filtrare. Filtrele noastre sunt concepute pentru a transmite în mod selectiv lungimile de undă ale luminii care corespund fluoroforilor specifici pe care îi utilizați, blocând în același timp lungimile de undă asociate cu autofluorescența.
De exemplu, dacă utilizați o proteină fluorescentă verde (GFP) ca fluorofor, filtrele noastre vor fi optimizate pentru a trece lumina verde emisă de GFP, respingând în același timp autofluorescența care apare în intervale de lungimi de undă similare. Acest lucru ajută la reducerea semnalului de fundal și la îmbunătățirea contrastului imaginilor dvs.
2. Imagistica multispectrală
Un alt instrument puternic din arsenalul nostru este imagistica multispectrală. Cu imagini multispectrale, sistemele noastre pot captura imagini la mai multe lungimi de undă simultan. Acest lucru ne permite să separăm semnalul de autofluorescență de semnalul de fluorescență specific.
Folosim algoritmi sofisticați pentru a analiza datele spectrale și pentru a crea o „amprentă” a autofluorescenței. Apoi, putem scădea această amprentă cu autofluorescență din imaginea generală, lăsând în urmă o imagine curată a fluorescenței specifice. Această tehnică este deosebit de utilă atunci când se ocupă cu probe complexe în care autofluorescența are un profil spectral larg.
3. Algoritmi de procesare a imaginii
Sistemele noastre de imagistică celulară sunt, de asemenea, echipate cu algoritmi avansați de procesare a imaginii, care sunt special proiectați pentru a reduce autofluorescența. Acești algoritmi pot analiza imaginea pixel cu pixel și pot identifica zonele în care este prezentă autofluorescența.
Odată ce zonele de autofluorescență sunt identificate, algoritmii pot ajusta intensitatea pixelilor pentru a reduce semnalul de fundal. Acest lucru se poate face într-un mod care păstrează integritatea semnalului de fluorescență specific, astfel încât să nu pierdeți nicio informație importantă.
Exemple din lumea reală
Să aruncăm o privire la câteva exemple din lumea reală a modului în care sistemele noastre de imagistică celulară i-au ajutat pe cercetători să depășească problemele de autofluorescență.
Un grup de cercetare studia expresia unei proteine specifice în celulele canceroase. Ei foloseau un anticorp fluorescent pentru a marca proteina, dar au primit o mulțime de autofluorescență din celule, ceea ce a făcut dificilă observarea colorării specifice.
Au decis să folosească noastreSistem inteligent de scanare cu celule live. Cu tehnologia avansată de filtrare și algoritmii de procesare a imaginii, am reușit să reducem semnificativ fundalul de autofluorescență. Cercetătorii au reușit apoi să vadă clar modelul de expresie al proteinei în celulele canceroase, ceea ce a reprezentat o descoperire majoră în studiul lor.
Un alt exemplu este o echipă de oameni de știință care lucrau la imagistica cu celule vii. Ei încercau să urmărească mișcarea unei molecule marcate fluorescent în timp real, dar autofluorescența din celulele vii interfera cu observațiile lor.
Au trecut la noiSistem de imagistică cu celule vii. Capacitățile de imagistică multispectrală ale sistemului le-au permis să separe autofluorescența de fluorescența specifică a moleculei marcate. Acest lucru le-a permis să urmărească cu exactitate mișcarea moleculei în timp, oferind informații valoroase asupra funcției sale în celulă.
Concluzie
Autofluorescența este o provocare comună în imagistica celulară, dar nu trebuie să fie un obstacol. Sistemele noastre de imagistică celulară sunt proiectate cu tehnologii și algoritmi avansati pentru a gestiona eficient autofluorescența și pentru a vă asigura că obțineți imagini precise și de înaltă calitate.
Dacă vă confruntați cu autofluorescența în experimentele dvs. de imagistică celulară, ne-ar plăcea să vă ajutăm. Echipa noastră de experți poate lucra cu dumneavoastră pentru a găsi cea mai bună soluție pentru nevoile dumneavoastră specifice. Indiferent dacă sunteți un cercetător în mediul academic sau un om de știință în industrie, sistemele noastre de imagistică celulară vă pot oferi instrumentele de care aveți nevoie pentru a depăși autofluorescența și pentru a vă atinge obiectivele de cercetare.
Dacă sunteți interesat să aflați mai multe despre sistemele noastre de imagistică celulară sau doriți să discutați despre o potențială achiziție, vă rugăm să nu ezitați să luați legătura. Suntem aici pentru a vă sprijini la fiecare pas.
Referințe
- Johnsen, PA și Remington, SJ (2008). Autofluorescență în probele biologice. Journal of microscopy, 230(1), 79-90.
- Murphy, DB (2001). Fundamentele microscopiei luminoase și imagistică electronică. Wiley-Liss.
